Me e -0900 Инсулин ифа


НазваниеMe e -0900 Инсулин ифа
Дата публикации26.03.2013
Размер55.6 Kb.
ТипДокументы
referatdb.ru > Физика > Документы
ME E-0900 Инсулин ИФА

Набор реагентов для ИФА для количественного определения Инсулина в сыворотке и плазме.

Только для in vitro диагностики.
Инсулин – это главный гормон, отвечающий за контроль метаболизма глюкозы. Он синтезируется в β-клетках островков Лангерганса в виде прекурсора, проинсулина, который затем преобразуется в С-пептид и Инсулин. С-пептид и Инсулин затем секретируются в эквимолярных количествах в систему циркуляции. Зрелая молекула инсулина состоит из двух полипептидных цепей, А цепь и В цепь (21 и 30 аминокислот соответственно). Цепи связаны между собой дисульфидными мостиками. Существуют также дисульфидные мостики внутри А цепи. Секреция инсулина зависит от концентрации глюкозы в крови, и этот гормон имеет ряд важных метаболических свойств. Основной функцией инсулина является контроль поглощения и утилизации глюкозы в периферических тканях с помощью транспортера глюкозы. Эта и другая гипогликемическая активность, такая как ингибирование печеночного глюконеогенеза и гликогенолиза, нейтрализуют действие гипергликемических гормонов, таких как глюкагон, адреналин, гормон роста и кортизол. Концентрация инсулина значительно снижается при инсулинозависимом сахарном диабете (ИЗСД) и некоторых других условиях, таких как гипофизарный нанизм.

Уровень инсулина повышается при инсулиннезависимом сахарном диабете (ИНСД), ожирении, инсулиномы и некоторые эндокринные дисфункции, такие как синдром Кушинга и акромегалия.
^ Принцип теста:

Набор Инсулин ИФА основан на методе твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА), основанный на принципе сэндвича.

Образцы пациента, стандарты и контроли подкислены и нейтрализуются непосредственно перед анализом.

Лунки покрыты моноклональными антителами к антигенам, расположенным на молекуле Инсулина.

Аликвоты образцов пациента, содержащие эндогенный инсулин, инкубируются в лунках с ферментным конъюгатом (анти-Инсулин антитела – Биотин). После инкубации несвязавшийся конъюгат вымывается.

Во время второго этапа инкубации ферментный Стрептовидин-пероксидазный комплекс связывается в биотин-анти-Инсулин антителами. Лунки промываются и инкубируются с ферментным комплексом (Стрептавидин-HRP-комплекс). Количество связавшегося HRP комплекса пропорционально концентрации Инсулина в образце.

После добавления раствора субстрата интенсивность цвета раствора пропорциональна концентрации Инсулина в образце.
^ Состав набора:


96

Микротитровальный планшет

12х8 (96 лунок), разборный; лунки покрыты моноклональными анти-Инсулин антителами.
^ Нулевой стандарт, 1 флакон, 3 мл, готов к использованию

0 мкМЕ/мл
Стандарты (1-5):

пять флаконов, по 1 мл, готовы к использованию.

концентрации: 6.25 - 12.5 – 25 - 50 и 100 мкМЕ/мл

Стандарты откалиброваны согласно рекомендациям ВОЗ,

^ NIBSC: 66/304.


Enzyme Conjugate,

Ферментный конъюгат

1 флакон, 5 мл, готов к использованию;

мышиные моноклональные антитела конъюгированные с биотином
^ Enzyme Complex Ферментный комплекс

1 флакон, 7 мл, готов к использованию.

стрептавидин-HRP комплекс


^ Substrate Solution

Раствор субстрата

1 флакон, 14 мл, готов к использованию; тетраметилбензидин (ТМБ).


^ Stop Solution

Стоп-раствор

1 флакон, 14 мл, готов к использованию, содержит 0,5 М серной кислоты

Избегайте контакта со Стоп-раствором. Это может вызвать раздражение кожи и ожоги.


^ Wash Solution

Промывочный раствор

1 флакон, 30 мл (40X концентрированный), см. "Подготовка реагентов".
Оборудование и материалы необходимые, но не входящие в комплект

- Микропланшетный анализатор (450±10)

- Откалиброванные переменные прецизионные микропипетки

- Абсорбирующая бумага

- Дистиллированная вода
^ Хранение и стабильность набора:

При хранении при температуре 2-8 ° С закрытые реагенты сохраняют активность до истечения срока годности. Не используйте реагенты после этой даты.

Открытые реагенты должны храниться при температуре 2-8 ° С.

Микротитровальный планшет должен храниться при температуре 2-8 ° С в плотно закрытом фольгированном пакете.
^ Подготовка реагентов:

Перед использованием все реагенты и необходимое количество стрипов должны быть комнатной температуры.
Промывочный раствор:

Добавьте к 30 мл концентрата промывочного раствора 1170 мл деионизированной воды, до конечного объёма 1 200 мл.

Разведенный промывочный раствор стабилен 2 недели при комнатной температуре.
Образцы:

Используется сыворотка или плазма (только гепарин- или цитрат-плазма)

Не используйте гемолизированные, желтушные и липемические образцы.
Хранение:

Образцы должны храниться закрытыми при температуре 2-8° С до 5 дней.

Возможно более длительное хранение однократно замороженных образцов при – 20 ° С. Размораживание должно проводиться непосредственно перед исследованием.
^ Разведение образцов:

Если при анализе установлено, что образец содержит более высокую концентрацию, чем стандарты, то образцы можно разбавить Стандарт 0 и провести повторное исследование, как описано в процедуре анализа.

При расчете результата должен учитываться фактор разведения

Пример:

  1. разведение 1:10: 10 мкл Образца + 90 мкл Стандарт 0 (тщательно перемешать)

  2. разведение 1:100: 10 мкл разведения а) + 90 мкл Стандарт 0 (тщательно перемешать)



^ Процедура анализа:

Перед применением все реагенты должны быть комнатной температуры. Стандарты, контроли и образцы должны исследоваться в дублях. Как только процедура анализа была начата, она должна быть завершена без перерыва.

  1. Закрепите необходимое количество стрипов на штативе.

  2. Добавьте по 25 мкл стандартов, контролей и образцов в соответствующие лунки новыми одноразовыми наконечниками.

  3. Добавьте по 25 мкл ферментного конъюгата в каждую лунку.

Тщательно перемешайте в течение 10 секунд. Важно добиться полного смешивания на этом этапе.

  1. Инкубируйте 30 минут при комнатной температуре в закрытом планшете.

  2. Резко вытряхните содержимое лунок.

Промойте каждую лунку 3 раза разведенным промывочным раствором (по 400 мкл на лунку). Для удаления остатков жидкости резко переверните планшет и прижмите к абсорбирующей бумаге.

Важно: чувствительность и точность данного анализа зависит от правильного выполнения процедуры промывки.

  1. Добавьте по 50 мкл Ферментного комплекса в каждую лунку.

  2. Инкубируйте 60 минут при комнатной температуре.

  3. Резко вытряхните содержимое лунок.

Промойте каждую лунку 3 раза разведенным промывочным раствором (по 400 мкл на лунку). Для удаления остатков жидкости резко переверните планшет и прижмите к абсорбирующей бумаге.

  1. Добавьте по 50 мкл Субстрата в каждую лунку

  2. Инкубируйте 15 минут при комнатной температуре.

  3. Для остановки ферментной реакции добавьте по 50 мкл Стоп-раствора в каждую лунку.

  4. Измерьте ОП на микропланшетном анализаторе при 450±10 нм в течение 10 минут после добавления стоп-раствора.

Расчет результатов:

  1. рассчитайте среднюю оптическую плотность каждого стандарта, контроля и неизвестного

  2. Нарисуйте калибровочную кривою на логарифмической бумаге со средней оптической плотности на Y-оси и концентрацией калибратора на X-оси. Если для анализа используется программное обеспечение, то рекомендуется кривая на 4-параметра.

  3. Рассчитайте значение неизвестных при помощи калибровочной кривой.

  4. Если концентрация образца выше стандартов, то образец должен быть разведен. При расчете результата необходимо учитывать фактор разведения.


Пример типичной стандартной кривой:

(не используйте для расчета)


Стандарт

ОП (450 нм)

Стандарт 0 (0 мкМЕ/мл)

0.03

Стандарт 1 (6,25 мкМЕ/мл)

0.07

Стандарт 2 (12,5 мкМЕ/мл)

0.14

Стандарт 3 (25 мкМЕ/мл)

0.35

Стандарт 4 (50 мкМЕ/мл)

0.88

Стандарт 5 (100 мкМЕ/мл)

2.05


Ожидаемые нормальные значения:

Настоятельно рекомендуется, чтобы каждая лаборатория определяла свои границы нормальных и аномальных значений.

2 – 25 мкМЕ/мл

Диапазон:

0 – 100 мкМЕ/мл

Чувствительность:

1,76 мкМЕ/мл

Похожие рефераты:

С ахарный диабет это заболевание, обусловленное недостаточностью...
Сахарный диабет – это заболевание, обусловленное недостаточностью или полным отсутствием гормона под названием инсулин. Инсулин необходим...
Ms e -5400 Кортикостерон ифа
Набор реагентов для ифа для количественного определения Кортикостерона в плазме и сыворотки
Id e 3700 Малярия Скрининг ифа
Набор реагентов для ифа для определения суммарных антител к Малярии в сыворотке человека
Набор реагентов для ифа для количественного определения igfbp1 в сыворотке человека
Основан на методе твердофазного иммуноферментного анализа (ифа), основанный на принципе двухэтапного захвата или «сэндвича»
Клинический протокол
Ьвеолит (далее-ифа). Ифа характеризуется воспалением и фиброзом легочного интерстиция и воздухоносных пространств, дезорганизацией...
Протокол вскрытия конвертов с тендерными заявками
Тендерные заявки потенциальных поставщиков, предоставивших тендерные заявки после истечения окончательного срока предоставления тендерных...
Протокол вскрытия конвертов с тендерными заявками
Тендерные заявки потенциальных поставщиков, предоставивших тендерные заявки после истечения окончательного срока предоставления тендерных...
Лекция тема: Использование методов генной инженерии для получения...
Тема: Использование методов генной инженерии для получения биологически-активных веществ (интерферон, инсулин, гормон роста, молекулярные...
Лекция тема: Использование методов генной инженерии для получения...
Тема: Использование методов генной инженерии для получения биологически-активных веществ (интерферон, инсулин, гормон роста, молекулярные...
Лекция тема: Продолжение. Использование методов генной инженерии...
Тема: Продолжение. Использование методов генной инженерии для получения биологически-активных веществ (интерферон, инсулин, гормон...

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2013
контакты
referatdb.ru
referatdb.ru
Рефераты ДатаБаза