Набор реагентов для ифа для количественного определения igfbp1 в сыворотке человека


Скачать 78.73 Kb.
НазваниеНабор реагентов для ифа для количественного определения igfbp1 в сыворотке человека
Дата публикации26.03.2013
Размер78.73 Kb.
ТипДокументы
referatdb.ru > География > Документы
ME E-0400 IGFBP-1 (Белок 1, связывающий Инсулиноподобный фактор роста)

Набор реагентов для ИФА для количественного определения IGFBP1 в сыворотке человека.

Только для in vitro диагностики.
Принцип теста:

IGFBP-1 ELISA основан на методе твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА), основанный на принципе двухэтапного захвата или «сэндвича».

Для анализа используются два вида высокоспецифичных моноклональных антител: А моноклональные антитела специфичные для IGFBP-1, иммобилизованные на лунках микропланшета, и другие моноклональные антитела IGFBP-1 специфические для разных регионов, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP). IGFBP-1 из стандартов и образцов

связываются в лунках микропланшета, затем промываются и инкубируются с HRP-конъюгатом. После второй промывки добавляют ферментный субстрат. Ферментная реакция останавливается добавление стоп-раствора. ОП измеряется в микропланшетном анализаторе. Интенсивность цвета образцов и ОП прямо пропорциональны концентрации IGFBP-1. Значение

Концентрации образцов определяются непосредственно с калибровочной кривой.
^ Клиническое применение:

IGFBP-1 - один из шести белков, которые специфически связываются с ИФР 1 и 2 в биологических жидкостях и тканях.

IGFBP-1 содержит 234 аминокислоту, с предикативной молекулярной массой 25 kDa. Вырабатывается IGFBP-1 плодом, печенью взрослых и децидуальным эндометрием.

Уровень IGFBP-1 в сыворотке, связанный с синтезом в печени, имеет значительные суточные колебания. Уровень циркулирующего IGFBP-1 имеет самое высокое значение утром и самое низкое – вечером. Также высокое значение IGFBP-1 наблюдается у плода и новорожденных, который неуклонно снижается к моменту половой зрелости. Средний уровень IGFBP-1 у здоровых взрослых составляет 4,4 мкг/л (диапазон 0.6-14.4 мкг/л). Примерно после 65 лет уровень в сыворотке начинает увеличиваться. Также существует обратная корреляция между индексом массы тела (ИМТ) и концентрацией в сыворотке, взятой натощак.

Наиболее важным регулятором циркулирующего IGFBP-1 является инсулин. Уровень инсулина натощак обратно пропорционален концентрации IGFBP-1 . Во время 3-часового теста на толерантность к глюкозе, наблюдает снижение примерно на 50% содержания в сыворотке IFGBP-1. Прием пищи также вызывает снижающий эффект.

При инсулинозависимом сахарном диабете (ИЗСД) уровень IGFBP-1 в сыворотке повышен. При инсулиннезависимом сахарном диабете, при котором наблюдает высокий уровень инсулина, концентрация IGFBP-1 в сыворотке снижается.

Низкие уровни IGFBP-1 наблюдаются также в следующих случаях:

акромегалия, синдром Кушинга и поликистозный овариальный синдром.
^ Забор и хранение образцов:

Сыворотка:

Возьмите кровь из вены, дайте ей свернуться и отделите сыворотку центрифугированием при комнатной температуре.

Хранение: при +4 ˚С до 24 часов

более длительное хранение при -10 ˚С.
^ Предварительная подготовка образцов:

Данный анализ является прямым. Предварительная подготовка образцов не требуется.
Дополнительные материалы и оборудование, необходимые, но не поставляемые в комплекте

- Прецизионные микропипетки со сменным одноразовыми наконечниками на 20, 50, 80, 100 и 300 мкл

- Дистиллированная или деионизированная бумага

- Микропланшетный шейкер

- Микропланшетный анализатор на 450 нм и пределом ОП 3,0 или больше.
^ Реагенты, входящие в состав набора:
AA E-0030 Концентрат промывочного буфера – x10

Содержит: 1 бутыль с не ионным промывочным раствором и консервантом, не содержащим ртуть.

Объём: 50 мл/бутыль

Хранение: 2-8˚С

Стабильность: 12 месяцев или как указано на этикетке

Способ приготовления: Перед использованием разведите дистиллированной или деионизированной водой 1:10. Если будет использован весь планшет, то разбавьте 50 промывочного буфера с 450 мл воды.
^ AA E-0055 ТМБ-субстрат – Готов к использованию

Содержит: Один флакон, содержащий тетраметилбензидин и перекись водорода в не- DMF или DMSO содержащем буфере.

Объём: 16 мл/флаконе

Хранение: 2-8˚С

Стабильность: 12 месяцев или как указано на этикетке
^ AA E-0080 Стоп-раствор

Содержит: 1 флакон, содержащий 1 М серной кислоты.

Объём: 6 мл/флаконе

Хранение: 2-8˚С

Стабильность: 12 месяцев или как указано на этикетке
^ Калибраторы и контроли – готовы к использованию

Ниже приведены примерные концентрации, пожалуйста, обратитесь к этикетке на флаконе для точной концентрации:

Кат.номер

Калибратор

Концентрация (мкг/л)

Объём

ME E-0401

Калибратор A

0

2,0 мл

ME E-0402

Калибратор B

1

0,5 мл

ME E-0403

Калибратор C

5

0,5 мл

ME E-0404

Калибратор D

30

0,5 мл

ME E-0405

Калибратор E

100

0,5 мл

ME E-0406

Калибратор F

250

0,5 мл

ME E-0451

Контроль 1

См. этикетку флакона

0,5 мл

ME E-0452

Контроль 2

0,5 мл


Содержит: сыворотку с IGFBP-1 в основном буфере с консервантом не содержащем ртуть. Содержат сыворотку с заданной концентрацией IGFBP-1.

Хранение: 2-8˚С

Стабильность: 12 месяцев или как указано на этикетке. Открытые стандарты или аликвоты должны быть использованы в течении 14 дней или заморожены. Избегайте повторных циклов замораживания/оттаивания.
^ ME E-0413 Буфер для анализа – Готов к использованию

Содержит: 1 флакон, содержащий основной белковый буферный раствор с консервантом, не содержащим ртуть.

Объём: 26 мл/флаконе

Хранение: 2-8˚С

Стабильность: 12 месяцев или как указано на этикетке
^ ME E-0431 Разборный микропланшет, покрытый мышиными анти- IGFBP-1антителами.

Готов к использованию

Содержит: Один 96 луночный (12х8) микропланшет с моноклональными антителами в закрывающемся пакете с осушителем.

Хранение: 2-8˚С

Стабильность: 12 месяцев или как указано на этикетке
^ ME E-0440 Концентрированный конъюгат IGFBP-1-HRP – х100

Содержит: конъюгат мышиных моноклональных анти-IGFBP-1 антител - HRP в буферном растворе с консервантом не содержащем ртуть.

Объём: 0,25 мл/флаконе

Хранение: 2-8˚С

Стабильность: 12 месяцев или как указано на этикетке

Способ приготовления: развести 1:100 с буфером для анализа перед использованием (например. 20 мкл концентрата в 2 мл буфера). Если будет использоваться весь планшет то нужно развести 120 мкл концентрата в 12 мл буферного раствора для анализа. Не использовать, что осталось.

^ Процедура анализа:

Все реагенты должны быть комнатной температуры. Исследование стандартов, контролей и образцов должны осуществляться в дублях. Как только процедура анализа начата, то все этапы должны быть завершены без перерыва.


  1. Приготовьте рабочие растворы конъюгата и промывочного буфера

  2. Извлеките необходимое количество микро луночных стрипов. Неиспользуемые поместите обратно в пакет, герметично запечатайте и верните в холодильник.

  3. Добавьте по 25 мкл каждого калибратора, контроля и разведенного образца в соответствующие лунки в дублях.

  4. Добавьте по 100 мкл буфера для анализа в каждую лунку (мы рекомендуем использовать многоканальную пипетку)

  5. Инкубируйте в шейкере (200 об./мин) 30 минут при комнатной температуре.

  6. Промойте каждую лунку по 3 раза: внося по 300 мкл приготовленного раствора промывочного буфера, удаляя остатки влаги абсорбирующей бумагой до сухого пятна (мы рекомендуем использовать вошер).

  7. Добавьте по 100 мкл рабочего раствора конъюгата в каждую лунку (мы рекомендуем использовать многоканальную пипетку)

  8. Инкубируйте в шейкере (200 об./мин) 30 минут при комнатной температуре.

  9. Промойте каждую лунку по 3 раза: внося по 300 мкл приготовленного раствора промывочного буфера, удаляя остатки влаги абсорбирующей бумагой до сухого пятна (мы рекомендуем использовать вошер).

  10. Добавьте по 150 мкл ТМБ-субстрата в каждую лунку через заданные интервалы времени.

  11. Инкубируйте планшет в шейкере при комнатной температуре 10-15 минут.

(или до того момента, когда Калибратор F станет темно-синим, достигнет нужной ОП)

  1. Добавьте по 50 мкл Стоп-раствора в каждую лунку через те же интервалы, что и в этапе 10

  2. Считайте результат на микропланшетном анализаторе при 450 нм в течение 20 минут после добавления Стоп-раствора.

Если ОП превышает верхний предел обнаружения или фильтр 450 нм недоступен, то можно заменить на фильтр 405 или 415nm. Оптические плотности будут ниже, однако, это не повлияет на результаты пациентов/контрольные пробы.


Расчет результатов


  1. рассчитайте среднюю оптическую плотность каждого калибратора в дублях

  2. рассчитайте среднюю оптическую плотность каждого неизвестного в дублях.

  3. Вычтите среднее значение абсорбции "0" калибратора из средних значений оптической плотности остальных калибраторов, контроля и образцов сыворотки.

  4. Нарисуйте калибровочную кривою на логарифмической бумаге со средней оптической плотности на Y-оси и концентрацией калибратора на X-оси. Если для анализа используется программное обеспечение, то рекомендуется кривая на 4-параметра.

  5. Рассчитайте значение неизвестных при помощи калибровочной кривой.

  6. Если концентрация образца получается более 220 мкг/л, то разведите его буфером для анализа в соотношении не более 1:10. Полученный результат следует умножить на фактор разведения.



5. Типичная таблица данных (не используйте для расчета)


Стандарт

ОП 1

ОП 2

Средняя ОП

Концентрация (мкг/л)

A

0.077

0.075

0.076

0

B

0.086

0.088

0.087

1

C

0.120

0.125

0.123

5

D

0.459

0.452

0.456

30

E

1.404

1.356

1.380

100

F

2.591

2.639

2.615

250

Неизвестная

0.120

0.117

0.119

4.5


Типичная калибровочная кривая (не используйте для расчета)

см. оригинал инструкции.
Чувствительность: 0,5 мкг/л

Ожидаемые нормальные значения:

Настоятельно рекомендуется, чтобы каждая лаборатория определяла свои границы нормальных и аномальных значений.


Группа

N

Среднее значение (мкг/л)

Диапазон (мкг/мл)

взрослые

55

4,4

0,6-14,4

Похожие рефераты:

Набор реагентов для ифа для количественного определения ифр-1 в сыворотке человека

Набор реагентов для ифа для количественного определения пролактина в сыворотке человека

Набор реагентов для ифа для прямого количественного определения тестостерона...

Набор реагентов для ифа для прямого количественного определения ттг в сыворотке человека

Набор реагентов для ифа для прямого количественного определения хгч в сыворотке человека

Me e -0900 Инсулин ифа
Набор реагентов для ифа для количественного определения Инсулина в сыворотке и плазме
Набор реагентов для ифа для прямого количественного определения тестостерона...
Прецизионные микропипетки с одноразовыми наконечниками на 25, 50, 100, 150 и 300 мкл
Набор реагентов для ифа для количественного определения ca 15-3 в сыворотке и плазме человека
Луночный (12Х8), стриповый, разборный микролуночный планшет, покрытый моноклональными анти- ca 15-3 антителами
Id e 3700 Малярия Скрининг ифа
Набор реагентов для ифа для определения суммарных антител к Малярии в сыворотке человека
Сексстероидсвязывающий глобулин (сссг, глобулин связывающий половые гормоны)
Набор реагентов для ифа для количественного определения сссг в сыворотке человека

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2013
контакты
referatdb.ru
referatdb.ru
Рефераты ДатаБаза