Министерство здравоохранения республики беларусь


Скачать 58.39 Kb.
НазваниеМинистерство здравоохранения республики беларусь
Дата публикации15.05.2013
Размер58.39 Kb.
ТипИнструкция
referatdb.ru > Медицина > Инструкция


МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ

БЕЛАРУСЬ

УТВЕРЖДАЮ
Первый заместитель Министра
______________ Д.Л. Пиневич

_____________________2011 г.
Регистрационный № 004-0112

МЕТОД ИММУНИЗАЦИИ БЕРЕМЕННЫХ ЛИМФОЦИТАМИ МУЖА В ЛЕЧЕНИИ ПРИВЫЧНОГО НЕВЫНАШИВАНИЯ

Инструкция по применению



УЧРЕЖДЕНИЕ-РАЗРАБОТЧИК: УЗ «Могилевская областная станция переливания крови», УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет»

АВТОРЫ: Е.И. Антух

к.м.н., доцент И.В. Смирнова

Т. Ф. Шепило

Витебск, 2011 г.

Предлагаемый метод иммунизации женщины аллогенными лимфоцитами мужа разработан с целью предотвращения развития нарушений репродуктивной функции женщин и будет способствовать оптимизации тактики ведения беременности у женщин с высоким риском невынашиванияи предназначен для врачей акушер-гинекологов.

Область применения: акушерство и гинекология.

^ ПЕРЕЧЕНЬ НЕОБХОДИМОГО МЕДИЦИНСКОГО ОБОРУДОВАНИЯ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

  1. Лабораторное оборудование: термостат, центрифуга, инвертированный флуоресцентный микроскоп, стерильная лабораторная посуда: пробирки 10 мл, микропланшеты, микрошприцы Hamilton.

  2. Микропланшеты с типирующими сыворотками, содержащими анти-HLA антитела.

  3. Комплемент.

  4. Раствор акридинового оранжевого/этидия бромида.

  5. Гепарин, урографин, буферный раствор (PBS).

  6. Контейнер для заготовки 400 мл крови, плазмоэкстрактор.

  7. 6% раствор полиглюкина, 10% раствор глюкозы.

  8. Оборудование для проведения и исследования общего анализа крови; группы крови и резус-принадлежности.

^ ПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ

Беременность у женщины, в анамнезе которой имеются 2 и более самопроизвольных аборта в сроках беременности до 12 недель, женщины у которых 2 и более неудачных попытки ЭКО в анамнезе, женщины с идиопатическим бесплодием.

^ ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ

Наличие в крови мужа антител к вирусу гепатита С, поверхностного антигена вируса гепатита В, антител к вирусу иммунодефицита человека первого и второго типов и антигена Р24 ВИЧ-1, суммарных антител классов G и М к возбудителю сифилиса. Аутоиммунные заболевания супругов.

^ ТЕХНОЛОГИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МЕТОДА.

КРИТЕРИИ ОТБОРА ПАЦИЕНТОВ

Методика отбора состоит из основного диагностического протокола, который проводится всем беременным, и дополнительных исследований, которые проводятся выборочно. Беременных женщин, в анамнезе имеющих два и более самопроизвольных аборта в сроках беременности до 12 недель, обследуют для исключения антифосфолипидного синдрома, генетических аномалий, эндокринных нарушений. При отсутствии выявляемой патологии и причин невынашивания беременности супружеские пары направляются для определения антигенов HLA первого класса локусов АВС.

Определение антигенов HLA первого класса у супружеских пар проводится микролимфоцитотоксическим методом. Перед проведением микролимфоцитотоксического теста готовят лимфоциты мужчины и женщины. Для этого в пробирку с 20 мкл гепарина набирают 9 мл крови биологического отца ребенка, добавляют 50 мг карбонильного железа, перемешивают и инкубируют 30 минут в термостате при 370С, периодически перемешивая. После этого разводят данный образец крови буферным раствором в соотношении 1:2 (1 часть крови, 2 части буферного раствора). В отдельную химическую пробирку помещают 5-7 мл лимфофлота и наслаивают на него разведенный образец крови, затем центрифугируют при 2700 оборотов 13 мин. Полученные лимфоциты переносятся в центрифужную пробирку и перемешиваются с буферным раствором, после повторного центрифугирования концентрация лимфоцитов в буферном растворе доводится до 2-2,5х103/мл. Таким же образом выделяют и лимфоциты женщины.

Проведение микролимфоцитотоксического теста проводится по следующей методике: типирующую панель размораживают при комнатной температуре непосредственно перед использованием. 1 мкл приготовленной взвеси лимфоцитов вносят в каждую лунку типирующей панели под масло (реакция антиген-антитело) и инкубируют 45 минут при комнатной температуре. Смешивают 1 мл комплемента с 50 мкл основного красящего раствора, добавляют по 5 мкл полученного разведения в каждую лунку. Инкубируют 60 минут в темноте при комнатной температуре, останавливают реакцию добавлением 5 мкл 1% раствора туши в каждую лунку. Результаты учитывают с помощью инвертированного флуоресцентного микроскопа.

Для процедуры иммунизации отбираются пары, у которых совпали два и более антигенов лимфоцитов в локусах А и В. Перед иммунизацией муж, как предполагаемый донор лимфоцитов, обследуется согласно инструкции по обследованию доноров крови и ее компонентов. Ему выполняются тесты на наличие в сыворотке крови антител к вирусу гепатита С, определение поверхностного антигена вируса гепатита В, антител к вирусу иммунодефицита человека первого и второго типов и антигена Р24 ВИЧ–1, суммарных антител классов G и М к возбудителю сифилиса. Все вышеуказанные тесты выполняются методом иммуноферментного анализа. Кровь обоих супругов обследуется на групповую принадлежность по системе АВО, типирование эритроцитов на наличие антигенов системы резус, наличие антигена Келл. Эти исследования проводятся методом прямой агглютинации с использованием моноклональных реагентов соответствующей специфичности.

Перед проведением иммунизации жена предупреждается о возможных негативных последствиях процедуры иммунизации лимфоцитами мужа и подписывает информационное согласие на проведение медицинской манипуляции.

Получение лейковзвеси для иммунизации проводится по следующей технологии: в условиях соблюдения асептики из контейнера для заготовки 400 мл крови удаляют стерильным одноразовым шприцем 55% объема находящегося в контейнере консерванта и вводят в контейнер 20 мл 6% стерильного раствора полиглюкина. В этот контейнер заготавливают 170 мл крови биологического отца. Контейнер помещают в термостат при температуре 370С на один час. После экспозиции полученную надосадочную жидкость с помощью плазмоэкстрактора отжимают в стерильный контейнер без консерванта. Затем из контейнера жидкость переносят в стерильные центрифужные пробирки. Пробирки центрифугируют при 1500 об./мин. 15 мин. Надосадочную жидкость из пробирок удаляют стерильным шприцом. В первую пробирку добавляют 1,5 мл 10% раствора глюкозы, после перемешивания раствор переносят в следующую пробирку, снова перемешивают и переносят в следующую и так до последней пробирки. Количество используемых пробирок зависит от объема снятой надосадочной жидкости после экспозиции контейнера с кровью в термостате. Обычно объем составляет от 30 до 40 мл,  поэтому используется от 4 до 6 пробирок объемом 10 мл, пробирки наполняются по 8 мл. Полученная взвесь является взвесью для иммунизации.

^ МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ИММУНИЗАЦИИ

Методика иммунизации и реиммунизации осуществляется следующим образом: в условиях соблюдения асептики взвесь для иммунизации женщине вводится внутрикожно в верхнюю наружную треть плеча (8-10 папул). Папулы делают инсулиновым шприцом, объем одной папулы 0,1-0,2 мм. На место введения накладывается стерильная повязка, 3-4 дня следует избегать попадания воды.

^ СРОКИ ПРОВЕДЕНИЯ ИММУНИЗАЦИИ

В течение беременности существуют периоды с высокой степенью вероятности прерывания: 6-17 недель; 21-22 недели; 29-30 недель. За две недели перед каждым критическим сроком необходимо обследовать сыворотку крови беременных женщин на анти-HLA активность и при отсутствии антител проводить введение лимфоцитов.

^ СРОКИ ПРОВЕДЕНИЯ РЕИММУНИЗАЦИИ

Через 14 дней после иммунизации и в последующем реиммунизации сыворотка крови женщины обследуется на анти-HLA активность методом комплементзависимой цитотоксичности. Если антитела к антигенам лимфоцитов биологического отца не выявляются, то процедура введения лимфоцитов повторяется.

перечень возможных осложнений или ошибок при выполнении и пути их устранения

При соблюдении технологии приготовления лимфоцитов ошибки исключены. Из осложнений возможна аллергическая реакция в месте введения лимфоцитов. Проведение предварительной пробной инъекции лимфоцитов мужа, при возникновении аллергической реакции устранит риск развития данного осложнения.


Похожие рефераты:

Министерство здравоохранения республики беларусь постановление
Национальный реестр правовых актов Республики Беларусь, 2002 г №143, 1/4234 с целью государственного регулирования- потребления табачных...
Инструкция о порядке использования сумм, высвободившихся в связи с
Республики Беларусь, 2003 г., N 25, 5/12000 Министерство финансов Республики Беларусь, Министерство культуры Республики Беларусь,...
Министерство здравоохранения республики беларусь постановление
Закона Республики Беларусь от 23 мая 2000 года, Положения о Министерстве здравоохранения Республики Беларусь, утвержденного постановлением...
Министерство здравоохранения республики беларусь пастанова «12» декабря...
Совета Министров Республики Беларусь от 28 октября 2011 г. №1446 «О некоторых вопросах Министерства здравоохранения и мерах по реализации...
Министерство здравоохранения республики беларусь пастанова «12» декабря...
Совета Министров Республики Беларусь от 28 октября 2011 г. №1446 «О некоторых вопросах Министерства здравоохранения и мерах по реализации...
Министерство здравоохранения республики беларусь
Совета Министров Республики Беларусь от 28 октября 2011 г. №1446 «О некоторых вопросах Министерства здравоохранения и мерах по реализации...
Министерства здравоохранения республики беларусь
Ведамасцi Вярхоўнага Савета Рэспублiкi Беларусь, 1995 г. N 4 и в целях недопущения распространения на территории Республики Беларусь...
Министерства здравоохранения республики беларусь
О совершенствовании порядка подготовки военно-медицинских кадров в Республике Беларусь (Национальный реестр правовых актов Республики...
Хозяйства республики беларусь и министерства здравоохранения республики беларусь
Закона Республики Беларусь от 12 ноября 2001 г. "О погребении и похоронном деле" (Национальный реестр правовых актов Республики Беларусь,...
Зарегистрировано в Национальном реестре правовых актов
Республики Беларусь, Министерство торговли Республики Беларусь, Министерство сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь,...

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2013
контакты
referatdb.ru
referatdb.ru
Рефераты ДатаБаза