МӘселелер және болашағы халықаралық ғылыми-тәжірибелік конференция материалдары 9-10 маусым 2011ж

Репродуктивное здоровье и гинекология. Проблемы и перспективы ^ CENTER FOR IMPLEMENTATION OF MODERN MEDICAL TECHNOLOGIES OF ADMINISTRATION OF THE PRESIDENT OF THE REPUBLIC OF KAZAKHSTAN CLINIC OF REPRODUCTIVE MEDICINE AND GYNAECOLOGY ZLIN, CZECH REPUBLIC KARAGANDA STATE MEDICAL UNIVERSITY ^ DEPARTMENT OF HEALTH OF KARAGANDA REGION ҚАЗАҚСТАН РЕСПУБЛИКАСЫ ПРЕЗИДЕНТІ ІСТЕРІН БАСҚАРУ ҚАЗІРГІ МЕДИЦИНАЛЫҚ ТЕХНОЛОГИЯЛАРДЫ ЕНГІЗУ ОРТАЛЫҒЫ ЧЕХИЯ, ЗЛИН Қ. РЕПРОДУКТИВТІК МЕДИЦИНА ЖӘНЕ ГИНЕКОЛОГИЯ КЛИНИКАСЫ ^ ҚАРАҒАНДЫ МЕМЛЕКЕТТІК МЕДИЦИНА УНИВЕРСИТЕТІ ҚАРАҒАНДЫ ОБЛЫСЫ ДЕНСАУЛЫҚ САҚТАУ БАСҚАРМАСЫ ЦЕНТР ВНЕДРЕНИЯ СОВРЕМЕННЫХ МЕДИЦИНСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ ^ УПРАВЛЕНИЯ ДЕЛАМИ ПРЕЗИДЕНТА РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН КЛИНИКА РЕПРОДУКТИВНОЙ МЕДИЦИНЫ И ГИНЕКОЛОГИИ г.ЗЛИН, ЧЕХИЯ КАРАГАНДИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ^ УПРАВЛЕНИЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ КАРАГАНДИНСКОЙ ОБЛАСТИ REPRODUCTIVE HEALTH AND GYNECOLOGY. PROBLEMS AND PERSPECTIVES Materials of international scientific-practical conference 9-10 June, 2011 ^ РЕПРОДУКТИВТІК ДЕНСАУЛЫҚ ЖӘНЕ ГИНЕКОЛОГИЯ. МӘСЕЛЕЛЕР ЖӘНЕ БОЛАШАҒЫ Халықаралық ғылыми-тәжірибелік конференция материалдары 9-10 маусым 2011ж. ^ РЕПРОДУКТИВНОЕ ЗДОРОВЬЕ И ГИНЕКОЛОГИЯ. ПРОБЛЕМЫ И ПЕРСПЕКТИВЫ Материалы международной научно-практической конференции 9-10 июня 2011 г. Караганда 2011 УДК 618+001 ББК 57.1+72 Р 38 ^ Р 38 Репродуктивтік денсаулық және гинекология. Мәселелер және болашағы: Халықаралық ғылыми-тәжірибелік конференция материалдары. Репродуктивное здоровье и гинекология. Проблемы и перспективы: Материалы международной научно-практической конференции. Reproductive health and gynecology. Problems and perspectives: Materials of international scientific-practical conference. - Қарағанды: ҚММУ баспасы, 2011. – 188 б. ISBN 978-601-202-108-0 Сборник содержит работы ученых и практических врачей Чехии и Казахстана, в которых рассматриваются актуальные вопросы репродуктивного здоровья и гинекологии, в том числе современные принципы перинатальных технологий, репродуктивное здоровье мужчин, бесплодие и возможности его лабораторной диагностики, экстрагенитальная патология у беременных, а также эндокринологические аспекты в гинекологии. УДК 618+001 ББК 57.1+72 Под общей редакцией профессора М. К. Телеуова Редакционная коллегия Р. С. Досмагамбетова, И. С. Азизов, З. З. Бектурганов, Б. Н. Кошерова, О. Г. Гордейко, З. А. Базылбекова, В. Б. Ташкенбаева, К. Т. Толеубеков, Ф. М. Шайзадина, Н. Н. Наурызов, Б. Ж. Култанов, Р. Х. Бегайдарова, С. К. Кудеринов, А. Р. Кульмагамбетова, А. А. Жумабаева, С. К. Шуахбаев, С. Н. Султанов, З. А. Базылбекова, М. О. Исаева, С. А. Каиргельдина, С. К. Сагандыкова, Г. К. Мамалинова, Г. Б. Мукашева (ответ. секретарь), А. Т. Андагулова, Е. С. Сербо (ответ. секретарь сборника). ISBN 978-601-202-108-0 © Карагандинский государственный медицинский университет, 2011 Г. Ж. Абильдинова, М. Ф. Баянова, Б. Камалиева, А. П. Вибе, А. В. Костина ^ АНАЛИЗ МИКРОДЕЛЕЦИЙ У ХРОМОСОМЫ В AZF ЛОКУСЕ У МУЖЧИН С ИДИОПАТИЧЕСКИМ БЕСПЛОДИЕМ Национальный научный центр материнства и детства (Астана) В настоящее время бесплодием страдают около 10-15% супружеских пар, при этом примерно в 50% случаев оно обусловлено нарушением репродуктивной функции со стороны мужчины, в 20% - нарушением репродуктивной функции обоих супругов [1,2]. Кроме того, бесплодие у мужчин в 40-50% случаев может быть связано с нарушениями количественных и/или качественных показателей эякулята [3,4]. Примерно у 31,7% мужчин причину бесплодия установить не удается (идиопатическое бесплодие) [5] и предполагается, что оно обусловлено генетическими или иммунологическими факторами. Мутации генов, контролирующих этапы сперматогенеза, могут приводить к нарушению подвижности, морфологических и фертильных свойств сперматозоидов, блоку сперматогенеза, проявляясь в диапазоне от легкого снижения сперматогенной активности до полного отсутствия половых клеток в семенных канальцах (синдром "только клетки Сертоли»). Так, микроделеции локуса AZF (Azoospermia Factor, фактор азооспермии) [6,7] хромосомы Y обнаруживаются в среднем в 10-15% случаев азооспермии и в 5-10% случаев олигозооспермии тяжелой степени [8,9], и обусловливают нарушения сперматогенеза и бесплодие у мужчин. На коротком плече У-хромосомы расположены: детерминирующий пол человека ген SRY (sex- determining region Y) и ген ZFY(zink finger protein Y) отвечает за формирование пола и оказывает частичное влияние на дифференцировку гонад, два гена позволяющие определить соответствие фенотипического пола генотипическому, а так же множество генов экспрессирующихся при сперматогенезе, такие как AZF регионы длинного плеча У-хромосомы [10,11]. В У хромосоме выделены три неперекрывающихся субрегиона: AZFa, AZFb и AZFc. Гены - кандидаты AZFa-субрегиона представлены на У хромосоме единственной копией, поэтому, даже точковые мутации могут вызывать нарушения сперматогенеза и приводить к бесплодию мужчин. Тогда как гены, субрегионов AZFb и AZFc содержат по три десятка генов, многие из которых представлены в двух и более копиях [12,13]. Наиболее частым типом полных AZF делеций являются AZFc делеций, доля которых составляет 65-70% от всех полных AZF делеций. Второе место по частоте встречаемости 15-20% занимают делеции, захватывающие регионы AZFс и\или AZFb (AZFb+с). Наиболее редко 5-10% выявляют делеции AZFa региона. В редких случаях обнаруживают другие типы AZF делеций, например, AZF a+b и AZF a+b+c. В большинстве случаев микроделеции являются мутациями de novo, но имеются сведения об единичных случаях наследования после экстракорпорального оплодотворения [14,15] Целью исследования: кариологическое исследование лимфоцитов периферической крови и изучение AZF региона У хромосомы у мужчин с нарушением сперматогенеза. ^ Материалы и методы. Материалом исследования явилась периферическая кровь мужчин обратившихся в медико-генетическое консультирование с диагнозом мужское бесплодие, патозооспермия. Всем 104 пациентам по показаниям проводили цитогенетическое и молекулярно-генетические исследования. Для проведения цитогенетических исследований использовали гепаринизированную, венозную кровь пациентов. Препараты хромосом получали из лимфоцитов периферической крови по стандартной методике: 1,5 мл сыворотки крупного рогатого скота, 6 мл –RPMI 1640 + стерильный L-глутамин, 0,15 мл фитогемагглютинина, 0,5 мл периферической крови, стерильный раствор 10 γ колхицина, гипотонический раствор 2,79% KCL, охлажденный раствор фиксатора -этаноловый спирт\100% ледяная уксусная кислота в соотношении 3:1, 3% ледяная уксусная кислота. Препараты окрашивали GTG-методом. Результаты цитогенетического исследования приведены согласно Международной системе номенклатуры цитогенетики человека[16]. Для проведения молекулярно-генетических исследований из периферической крови была выделена геномная ДНК (набором «Promega», USA). Мультиплексную полимеразную цепную реакцию (мПЦР) проводили на программируемом термоциклере ТП4-ПЦР-01 (ДНК-технология), с использованием Taq-полимеразы. Состав ПЦР смеси: ПЦР буфер-5,0 мкл, dNTPs-12,5мкл, праймеры-1,0 мкл, Taq-полимераза-0,2 мкл, H2O-14,3 мкл, ДНК-2,0 мкл, контрольная ДНК-2,0 мкл. Общее количество смеси -25 мкл. Программа ПЦР проводилась в следующем режиме: 95- 5 мин; 94- 45 сек, 65- 45 сек,72- 45 сек - 30 циклов; 72-7 мин. Результаты амплификации оценивали методом электрофореза в 7 % полиакриламидном геле, с последующим окрашиванием в растворе бромистого этидия. Набор праймеров использованных на данном этапе, позволял исследовать 9 STS-маркеров, специфичных для AZF-локусов: 1) для субрегиона AZFa: sY86; sY84; sY615; 2) для субрегиона AZFb: sY127, sY134; 3) для субрегиона AZFc : sY254 , sY255; 4) SRY;5) ZFY. ^ Результаты и обсуждение. Анализ спермограммы показал, что наиболее часто в 59 % случае были диагностированы азооспермии, астенотератозооспермия и тератоспермии, олигоастенозоосперия - в 10 %, и олигозооспермии - в 5 % случаев. Как видно из данных таблицы 1 при цитогенетическом исследовании лимфоцитов периферической крови нормальный кариотип - 46,ХУ был диагностирован у 85% (89) пациентов. Хромосомная патология была выявлена в 15% случаев (15) пациентов. Анализ хромосомной патологии показал, что среди аберраций превалируют числовые хромосомные нарушения, так в 14 случаях диагностирован синдром Клайнфельтера (47,ХХУ) и в одном случае структурные хромосомные аберрации - робертсоновская транслокация - 45, ХУ, der (14;15)(q10;q10). Следует отметить, у пациентов с хромосомными аномалиями изменения в 80 % (12) измененных спермограмм составили азооспермия, у 20 % пациентов (3) - астенотератозооспермия и олигозооспермия. Молекулярно-генетические исследования микроделеции У хромосомы были проведены 50 (48%) мужчинам с патозооспермией и имеющих нормальный кариотип– 46,ХУ. Микроделеции У- хромосомы обнаружены у 7 пациентов, что составило 14%. Были выявлены делеции AZF локусов: AZF a- 14%, AZF b- 14%, AZF а+b- 14%, AZF с-44%. В одном случае обнаружена делеция ZFY гена, которая не ассоциирована с нарушением сперматогенеза, используется в качестве маркера короткого плеча У хромосомы. По результатам наших исследований видно, что у мужчин с показаниями «азооспермия и тяжелая олигозооспермия» наиболее часто встречалась микроделеция AZF с- субрегиона в 44%, и с одинаковой частотой равной 14% встречались микроделеций AZF a, AZF b, AZF а+b . Таблица 1. Цитогенетические и молекулярно-генетические показатели у мужчин с нарушением сперматогенеза Диагноз Количество Спермограмма Кариотип Бесплодие 82 (85 %) Патозооспермия 46,ХУ Гипофизарный гипогонадизм 6(6%) Азооспермия 47,ХХУ Бесплодие. Программа ЭКО 1(1%) Олигозооспермия 45,ХУ,de (14;15)(q10;q10) Бесплодие 7(7%) Азооспермия 47,ХХУ 1(1%) Астенотератозооспермия 47,ХХУ Микроделеции У хромосомы в локусе AZF a,b,c,a+b регионов 7 (14%) Азооспермия 46,ХУ Так, по данным литературы, для пациентов при обнаружении делеции локуса AZFс в У хромосоме у 71% пациентов могут быть извлечены зрелые сперматозоиды, c помощью ИКСИ в сочетании с извлечением тестикулярных сперматозоидов, в то время как у пациентов с мутацией в локусах AZFa, AZFb прогноз оплодотворения яйцеклетки неблагоприятный [15]. Таким образом, учитывая высокую частоту хромосомной патологии у пациентов с бесплодием неясного генеза, которым рекомендовано экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) или ИКСИ , необходимо проводить комплексное обследование, с обязательным цитогенетическим исследованием лимфоцитов периферической крови и молекулярно-генетический скрининг локусов AZF У хромосомы. Литература Vogt P.H., et al. Human chromosome Y azoospermia factors (AZF) mapped to different subregions in Yql1. Hum Mol Genet 1996; 5:933-943 Hargreave T.B., et al., Chromosome Y microdeletions and male subfertility. Androl 1996;28: Suppl:19-21 Pryor I.L., et al., Microdeletions in the Y chromosome of infertile men. New Eng J Med 1997;336:534-53 Черных В.Б. AZF делеции - частая генетическая причина бесплодия у мужчин: современное состояние исследований //Проблемы репродукции.-№1.-2009.-С.-10-14. Вартанян Э.В., Петрин А.Н., Курносов Т.Р. Генетические факторы мужского бесплодии //Проблемы репродукции.-№2.-2010.-С.74-78. Федорова И.Д., Кузнецова Т.В. Генетические факторы мужского бесплодия. //Журнал акушерства и женских болезней. -№ 1. -2007. - С. 64-72. Foresta C., et al., Y chromosome microdeletions and alterations of spermatogenesis // Endocr. Rev. 2001. V. 22. P. 226-239 Черных В. Б, Курило Л. Ф, Шилейко Л. и др. Анализ микроделеций в локусе AZF у мужчин с бесплодием: совместный опыт исследований. // Медицинская генетика.-№8.-2003.-С. 367-379 Глинкина Ж.И., Кузьмичев Л.Н., Бахарев Л.Н. Профилактика наследования мутаций в AZF-локусе хромосомы Y у потомства мужчин с нарушением репродуктивной функции // Акушерство и гинекология.-№1.-2009.-С. 52-55 Черных В.Б. Макро- и микроструктурные перестройки Y хромосомы //Медицинскаягенетика.-№10.-2007.-С.45-52 Гоголевский П.А., Гоголевская И.К., Крамеров Д.А. и др. AZF-микроделеции и мужское бесплодие. // Андрология и генитальная хирургия.- № 4.- 2001.-С.73–78 Тарасова М.Н., и др., К диагностике нарушений репродуктивной функции мужчин //Проблемы репродукции. -№ 5,- 2008.-С.52-55 Ahmadi A., Ng S.C. Fertilizing ability of DNA-damaged spermatozoa. J Exp Zool 1999;284:696—704 Долгов В.В., Луговская С.А., Фанченко Н.Д. и др. Лабораторная диагностика мужского бесплодия. М 2006;145 ISCN 2009. An International System for Human Cytogenetic Nomenclature / Ed.Mitelman F. Basel: S. Karger.-2009.-138 p

Похожие рефераты: